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    Envirochek两虫检测系统

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    一、格维恩科技有限公司在两虫检测方面的工作

    格维恩科技有限公司是中关村科技园的高新技术企业,致力于环保领域的先进技术研发、引进和推广。本公司创始人曾被美国EPA聘为水处理过程的优化控制高级咨询专家,在美国国家环保基金(EPA),美国航天局(NASA)基金:现就职于美国国家水质研究中心,美国国家可持续供水中心,其所在的实验室是美国EPA认证可从事“EPA1623方法测定的标准实验室之一。

         我公司利用EPA1623方法对两虫 隐孢子虫和贾第鞭毛虫)检测有多年的研究经验,现在大陆地区独家销售美国EPA1623方法推荐的PALL公司和Dynal公司用于监测的必备设计和设备。目前,北京、天津、上海、成都、广州、深圳、佛山等水司都应用了我公司代理的两虫检测试剂和设备,为保障两虫实验工作的顺利开展,我公司愿利用我们坚实的技术的实力,为水司在该领域提供优质、良好的技术培训和售后服务。

     20057月初,我公司协助中国水协科技委、天津市水协、天津市自来水集团有限公司主办的水质监测技术交流大会在天津成功召开。在大会上,由我公司聘请的美国国家水质研究中心的Hondon Ryu博士针对两虫监测的EPA1623方法做了精彩的演讲。Ryu博士对EPA1623方法在美国应用的概况,EPA1623方法的实验操作规则,及注意事项进行了详细讲解。并在天津市自来水集团水质中心两虫实验室对实验室全过程,包括水样过滤、免疫磁分离(IMSDAPI着色和差分干涉相衬(DIC)显微镜检测法的实验过程亲自进行了演示,重点强调了实验技巧、实验细节问题和注意事项。参与的全国15家水司60多人观看了Ryu博士的演示,并在显微镜下观察下Ryu博士制作的两虫样片,对隐孢子虫和贾第鞭毛虫的外观形态有了直观的认识。

     目前,我公司还在与国内有关水司一起合作,致力于利用便携式或在线颗粒物计数仪来间接表征两虫在水体的风险研究。其基本原理是通过找到爱不同水体中大于2微米的颗粒物数量与隐孢子虫和贾第鞭毛虫(隐孢子虫为4-7微米,贾第鞭毛虫为3-15微米)出现频率间的关系来实现上述目标。研究结果表明该方法经济、简便、有效、在水厂日常操作运行中,能有效保障饮用水安全性,是监测两虫必不可少的手段。

    我公司愿与业内各位同仁一起共同进步、共同发展,为保障外国饮用水安全做出自己最大的贡献。

    二、EPA1623方法的操作简介

       “EPA1623方法是由美国国家环保局指定的用于测定水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫的标准方法。概况地说,该方法分为三部。第一,水样进行过滤收集水中的乱囊和孢囊;第二,利用免疫磁分离来纯化过滤样品;第三,对纯化的样品通过免疫荧光显微镜法来监测两虫的数量。

    1、水样过滤

    采用美国EPA推荐的PALL公司Envirochek-HV囊式滤器对水过滤,将卵囊、孢囊及其他无知收集在过滤器上。该过滤器可用于实验室批量水样的过滤,也可以用于野外现场水样的过滤。过滤后的囊式滤器,用洗脱剂将拦截在滤囊上的颗粒物震荡洗脱下来,并将洗脱物收集在一个250毫升的离心管中。

    1)两虫检测囊式过滤器:水样过滤采用图2所示的方法将PALL公司囊式滤器(见图3)安装好,过滤器的滤囊用图4所示的震荡器进行洗脱分离。

     2)特点

    l   EPA16221623方法推荐首选产品。

    l   1um孔径的改良滤膜能100%截留两虫。

    l   一次性使用的设计避免了因其他因素的污染而造成的实验结果误差。

    l   专用于源水与自来水的隐孢子虫与贾第鞭毛虫的浓缩与回收,使用简单、方便、快 

    捷。

    2、免疫磁分离   
          离心管中的洗脱物通过离心分离作用,使颗粒物沉淀在离心管底部,同时去掉离心管中的上清液。将离心后的含有卵囊和孢囊的沉淀物用纯水混匀,并向其中加入Dynal公司的免疫磁分离试剂(Dynabeads GC-Combo试剂盒)进行磁分离。具体做法是:首先用带有抗体(抗隐孢子虫和贾第鞭毛虫)的特殊磁珠捕获沉淀物的卵囊和孢囊;其次通过Dynal公司的MPC-S磁粒浓缩器将捕获有卵囊和孢囊的磁珠吸附在试管壁上,去掉未被吸附在试管壁上含杂质的液体,以达到卵囊和孢囊从沉淀物中分离出来的目的;再次加入盐酸将管壁上捕获有卵囊和孢囊的磁珠进行洗涤,以使卵囊和孢囊从磁珠上解离出来;最后将含有卵囊和孢囊的纯化液转移至井形载玻片上进行制片。

    l  隐孢子虫和贾第鞭毛虫的纯化免疫磁分离技术

    1999年美国环保局在EPA1623方法中规定利用IMS{Immuo Magnetic Separation}免疫磁分离技术Dynabeads来分选检测饮用水中隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫孢囊,其原理是:利用带有特异性抗体的磁珠与样品中的目标产物G/C特异性抗原相结合,在磁场中搞笑选择中分离。 

    3IFA染色镜检 
          待井形载玻片的纯化液干后,用NaOH中和井形载玻片上样品,再用Dynal公司的Aqua-GloTMG/C染色试剂盒,将卵囊和孢囊在井形载玻片上用磁荧光标记的单性抗体和DAPI溶液着色后,盖上盖玻片。然后,OLYMPUS荧光和差分干涉相衬(DIC)显微镜对着色样本进行检测。观察样本,对符合卵囊和孢囊大小、外形、荧光特性的对象进行定性、定量分析。 
       

    l  研究型正置荧光生物显微镜系统:

    本实验中所配置的OLYMPUS正置阳光生物显微镜可以很好地完成明场和暗场显微镜观察,具有良好的可靠性、稳定性和实验室广泛应用等特性。显微镜数码照相部分所配置的数码照相机,为专业应用的高清晰度数码相机,采用不同于民用的数码数据采集及系统,此款相机的成像最高可达到1200万像素级别,并且在使用明场拍摄的同时可以可靠、稳定地完成荧光图像、暗场等特殊拍摄的要求,对实验图像数据的记录、再现和分析提供了很好的可能和保障;该相机的相关系统是目前应用比较普通、性能比较优越的;如出现问题也方便维修和更换配件。配备微机及色彩打印系统效果更佳。


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